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发布时间:2022-06-16 06:03

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细胞来源说明:细胞主要来源atcc、dsmz、ecacc、riken、incell、promocell、sciencell、ecacc、jcrb、kclb、asterand、iclc以及少数国外大学建系
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细胞复苏相关注意事项:1.取细胞的过程中注意带好防冻手套,护目镜。此项尤为重要,细胞冻存管可能漏入液氮,解冻时冻存管中的气温急剧上升,可导致爆炸。2.冻存液的问题:冻存液的配置已是常识,在这里不作详述,但二甲基亚砜(dmso )对细胞不是完全,在常温下,二甲基亚砜对细胞的毒副作较大,因此,必须在1-2min内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢,会造成细胞的损伤,二甲基亚砜(dmso)z好选择进口产品。3.离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较高,注意加入少量培养液可稀释其浓度,以减少对细胞的损伤。4.离心问题:目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养,第二天换液。因为离心的目的是两个,去除dmso,去除死细胞,这个是标准流程,但对一般人来说,把握不好离心转速和时间,转的不够活细胞沉底的少,细胞就全被扔掉了,转过了活细胞会受压过大,死亡。此外在操作过程中容易污染,所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜(dmso),dmso对细胞有一定的毒副作用,所以须将离心后的液体前倒净,且一定倒干净。我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏,结果无异常。5.细胞贴壁少的问题:教科书中说明冻存细胞解冻时1ml细胞液要加10ml-15ml培养液,而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。6.复苏细胞分装的问题:试验中我的经验总结为复苏1管细胞一般可分装到1-2只培养瓶中,分装过多,细胞浓度过低,不利于细胞的贴壁。7.加培养基的量放入问题:这个量的多少的把握主要涉及到的问题dmso的浓度,从如果你加培养基的太少,那么dmso的浓度就会比较大,就会影响细胞生长,从以前的资料来看,dmso的浓度在小于0.5%的时候对一般细胞没有什么影响,还有一个说法是1%。所以如果你的冻存液的浓度是10%dmso的话那么加10ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。
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细胞生长特性:悬浮细胞的多细胞聚集体,和一些贴壁细胞
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培养细胞真的不难,z关键几点:1)所有的东西使用z好的,如果你用的血清、培养皿、培养基、胰酶什么的都是进口的,真的很难相信你会把细胞养坏;2)动作要快,胰酶消化,换液什么,细胞暴露在空气中的时间越少越好。另外,要掌握好胰酶消化时间,所谓的细胞状态差,很多时候是传代的原因;3)有时间的话,需要细胞计数,传相应数目的细胞到培养皿中,可以大致清楚细胞的生长曲线,不会临时要处理,手足无措;4)要做什么心里要非常清楚,合理安排时间,传代细胞的实验穿插进行,可以节省很多时间,也不会耽误别人的实验;5)个人的实验器具自己收一套,不要和别人混用,z近换了什么新的东西稍微记一下,试剂一旦怀疑污染,马上丢;6)传代细胞不能进去太多人,避免相互干扰。每天对待细胞比孝敬爹妈还用心,那真是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,看在眼里怕丢了,培养细胞时有哪些经验教训可以分享呢?1)严格无菌操作,多喷喷酒精,要是对灭菌的东西不放心,自己包自己送自己烘干;2)不要和别人共用试剂耗材,自己准备一套;3)有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测;4)水浴锅很脏,生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏,勤换(灭菌水加进去);5)晚上离开的时候z好给传代细胞照紫外,超净台是用完就开;6)z好的是同一时间就你一个人在用传代细胞在养细胞。
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细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
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以下对初次培养细胞人员来说,是非常好的开门教程:准备室的设备:单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜(放置未消毒物品)、储品柜(放置消毒过的物品)、包装台;配液室的设备:扭力天平和电子天平(称量药品)、ph计(测量培养用液ph值)、磁力搅拌器(配置溶液室搅拌溶液);培养室的设备:液氮罐、储品柜(存放杂物)、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱(-80℃)、空调、二氧化碳缸瓶、边台(书写实验记录);必须放在无菌间的设备:离心机(收集细胞)、超净工作台、倒置显微镜、co2孵箱(孵育培养物)、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱(放置serum和培养用液)。无菌室的灭菌:定期打扫无菌室:每周打扫一次,先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等,然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5%擦拭;co2孵箱(培养箱)灭菌:先用3‰新洁尔灭擦拭,然后用75%酒精擦拭或者0.5%,再用紫外灯照射;实验前灭菌:打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟;实验后灭菌:用75%酒精(3‰新洁尔灭)擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台;实验人员的无菌准备:肥皂洗手、穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋、用75%酒精棉球擦净双手。
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细胞形态特性:上皮细胞
人细胞间粘附分子5(icam5)elisa试剂盒,英文名:human icam5 elisa kit,规格:48t/96t
gist-882细胞实验室平台;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
mc-38细胞实验室平台;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮细胞样;细胞传代方法:1:2传代
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细胞产品包装:复苏形式:t25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
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hamepic细胞实验室平台;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
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小鼠幽门螺旋杆菌热休克蛋白60(hp-hsp60)elisa试剂盒,英文名:mouse hp-hsp60 elisa kit,规格:48t/96t
细胞背景资料:详见相关文献介绍
nci-h1435细胞实验室平台;细胞生长特性:贴壁生长,松散;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:3-1:6传代,每周换液2-3次
nugc-3细胞实验室平台;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮样;细胞传代方法:1:6传代
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hra-19细胞实验室平台;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
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细胞传代方法:每周换液2-3次。
nci-h660细胞实验室平台;细胞生长特性:悬浮生长;细胞形态特性:上皮细胞;细胞传代方法:2-3天换液1次。
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